Guanidine hydrochloride mhuwiex biss intermedjarju f'komposti organiċi bħal farmaċewtiċi, pestiċidi, u żebgħat, iżda wkoll aġent qawwi ta 'denaturazzjoni użat fl-esperimenti ta' estrazzjoni ta 'RNA minn ċelloli għad-denaturazzjoni tal-proteina u r-refolding {. Dan l-artikolu jiġbor fil-qosor ir-rwol ta' guanidine idrokloridu fid-denaturazzjoni tal-proteina u refolding
1. guanidine hydrochloride jista 'denatura proteini .
Il-proteini huma faċilment affettwati minn fatturi esterni bħal aġenti tat-temperatura u denaturazzjoni, li jwasslu għal bidliet konformazzjonali, telf ta 'attività, u bidliet anormali fil-proprjetajiet fiżiċi u kimiċi . Dan il-proċess jissejjaħ denaturazzjoni tal-proteina .} guanidine hydrochlride huwa aġent ta' denaturazzjoni importanti li jista 'jipproduċi effetti ta' denaturazzjoni b'saħħit
Wieħed huwa l-effett tas-solubilizzazzjoni ta 'guanidine hydrochloride fuq residwi ta' aċidu amminiku idrofobiku . guanidine hydrochloride jista 'jkisser bonds ta' idroġenu fi strutturi ta 'proteina, iżid is-solubilità ta' molekuli mhux polari li fihom ktajjen sekondarji ta 'l-aċidu amino {2} Jista 'jorbot b'mod preferenzjali ma' guanidine hydrochloride biex jifforma kumplessi ta 'aġent ta' denatura ta 'proteina . Wara li jitneħħew il-kumplessi, l-ekwilibriju tar-reazzjoni jċaqlaq lejn il-lemin, u l-istat naturali tal-proteina jsir kumpless, li fl-aħħar jirriżulta f'denatura sħiħa tal-proteina . Dgħajjef ħafna, u biss konċentrazzjonijiet għoljin ta 'aġenti ta' denaturazzjoni jistgħu jikkawżaw denaturazzjoni sħiħa tal-proteini . Ġeneralment, denaturazzjoni kkawżata minn guanidine hydrochloride ġeneralment hija riversibbli .
2. Refolding tal-proteina u dissoluzzjoni tal-proteina .
Meta l-kundizzjonijiet tad-denaturazzjoni huma severi u persistenti, id-denaturazzjoni tal-proteina hija irreversibbli . wara li jitneħħew il-fatturi ta 'denaturazzjoni ta' xi proteini denaturati, huma jistgħu jirritornaw awtomatikament għall-istat naturali tagħhom, li jissejjaħ proteina mill-ġdid . fil-proċess ta 'riflessjoni tal-proteina, l-ewwel pass huwa biex jinħall Jirreferi għall-proteina espressa minn batterji li jgħaqqdu fiċ-ċelloli, li jiffurmaw partiċelli solidi inattivi mingħajr forma fissa, u ma jinħallux fl-ilma, li jinħallu biss fl-aġenti ta 'denaturazzjoni bħal urea u guanidine hydrochloride .
Wara, billi jitneħħa bil-mod l-aġent ta 'denaturazzjoni, il-proteina fil-mira tiġi rrestawrata mill-istat estiż kompletament tagħha għall-istruttura mitwija normali tagħha, filwaqt li t-tneħħija tal-aġent li tnaqqas tippermetti l-formazzjoni normali ta' bonds disulfide {{0} ġeneralment, il-proċess ta 'riflessjoni ta' guanidine hydrochloride jibda f'4M u jispiċċa f'4M u finijiet f'1 . 5m. Hemm metodi differenti kif ġej:
Dilwizzjoni u Renaturazzjoni: Żid direttament l-ilma jew is-soluzzjoni buffer biex tiddilwixxi s-soluzzjoni u ħalliha tpoġġi matul il-lejl biex tippreċipita l-proteina . L-iżvantaġġ huwa li l-volum jiżdied u r-rata ta 'dilwizzjoni ta' l-aġent ta 'denaturazzjoni hija mgħaġġla wisq, u tagħmilha diffiċli li tikkontrolla {. dijalisi jew rinatura ta' filtrazzjoni: l-aġent żgħir Il-membrana waqt id-dijalisi jew filtrazzjoni . il-vantaġġ tal-konċentrazzjoni tal-aġent ta 'denaturazzjoni li tonqos gradwalment fis-soluzzjoni tal-proteina denaturanti hija li ma żżidx il-volum . Ir-rata ta' tneħħija tal-aġent ta 'denaturazzjoni tista' tiġi kkontrollata billi titnaqqas gradwalment il-konċentrazzjoni tal-permi estern, iżda l-proċess jirrikjedi l-ħin . Renatur Ir-rinaturazzjoni tinkiseb fil-proċess kromatografiku, li huwa metodu studjat reċentement u applikat b'suċċess fil-produzzjoni . Il-vantaġġ huwa li l-iffissar kromatografiku għandu kapaċità ta 'adsorbiment baxxa għal proteini żnaturati, li jista' jtejjeb il-kwalità tar-refolding u r-rendiment ta 'attività . fl-istess ħin, jista' jissepara l-proteini mmirati faċilment .
Il-proteini huma bijomolekuli relatati mal-ħajja, sustanzi essenzjali għaż-żamma tal-funzjonament normali ta 'organiżmi ħajjin, u wkoll il-kodiċi tat-tieni ġenerazzjoni tal-wirt tal-ħajja . L-istudji varji fuq il-proteini huma wkoll suġġetti ta' interess għan-nies, u r-riċerka strutturali tagħhom hija kruċjali għall-avvanz tal-progress mediku. Riċerka . Fosthom, l-aġent ta 'denaturazzjoni guanidine hydrochloride jista' denatura proteini, u jagħmilha faċli biex tistudja l-istruttura tagħhom . Matul il-proċess ta 'riflessjoni, tista' tinħall il-proteini fil-korp, u għandha rwol indispensabbli fir-riċerka tax-xjenza tal-ħajja {{4}